Die Herstellung von CAR-T Zellen für adoptive Immuntherapien in der Klinik
– mit den NucleoCounter® Instrumenten
Der NucleoCounter® NC-200™ gewährleistet die robuste und akkurate Bestimmung der Zellzahl und der Viabilität von T Zellen bei der Produktion von CAR-T Zellen. Die einzigartige Via1-Cassette™ kombiniert die Probennahme, Anfärbung und das Laden der Zählkammer in einem einzigen Schritt. Die Erfassung und Analyse der Daten übernimmt hierbei automatisch die NucleoCounter® Software, wodurch eine hohe Reproduzierbarkeit erreicht wird.
Durch die Fluorophore Acridinorange und DAPI, welche sich bereits in der Via1-Cassette™ befinden, können T Zellen präzise detektiert werden, selbst wenn die Probe durch Erythrozyten oder Beads verunreinigt ist. Somit eignet sich das NucleoCounter® System perfekt für die Anwendung in der Zelltherapie.
Adoptive Immutherapien mit CAR-T Zellen
Kontrolle des gesamten Herstellungsprozesses von der Leukapherese bis hin zur Produktfreigabe mit dem Nucleocounter® NC-200™
Abbildung 1: Kontrolle des gesamten Herstellungsprozesses von der Leukapherese bis hin zur Produktfreigabe.Mit dem Nucleocounter® NC-200™ können alle Schritte der Isolation, Aufreinigung und Produktherstellung von CAR-T Zellen mit ein und demselben Gerät lückenlos überwacht werden. Hierdurch werden durchgehend präzise und glaubwürdige Ergebnisse generiert.
Einfache und adaptierbare Protokolle erlauben die Zellzählung ausgehend von der Leukapherese sowie von aufgereinigten und expandierten CAR-T Zellen mit ein und demselben Gerät. Die Via1-Cassette™ vermeidet inakkurate Ergebnisse, welche sich mehrheitlich bei der Zellzählung unter Verwendung von Hellfeldmikroskopie ergeben, da die Fluorophore zur Zellzählung – Acridinorange und DAPI – bereits in der Via1-Cassette™ enthalten sind. Enthält das Probenmaterial noch Erythrozyten, wird durch die Verwendung eines Erythrozyten-Lysepuffers der quenchende Effekt des Hämoglobins verhindert. Anschließend können die Gesamtzellzahl und die Anzahl der toten Zellen einfach durch die Via1-Cassette™ mit Acridinorange und DAPI bestimmt werden. Von der Analyse werden Zellfragmente und Artefakte wie z.B. Mizellen, sowie zu kleine Events, z.B. Thrombozyten ausgeschlossen. Weiterhin haben auch magnetische Beads, welche oftmals zur Isolation von T Zellen verwendet werden, keinen Einfluss auf die Zellzählung mit dem NucleoCounter® NC-200™. Somit kann der NucleoCounter® NC-200™ durchgehend für den gesamten Produktionsprozess verwendet werden.
Application note (.PDF):
Datenmanagement und Datenpräsentation
Abbildung 2: Datenmanagement und Datenpräsentation mit der begleitenden NucleoView™ Software. Die Software erlaubt die einfache Kopplung zwischen dem generierten Fluoreszenzbild und den Diagrammen für eine präzise Kontrolle der Daten.
Die NucleoView™ Software erlaubt die visuelle Inspektion des Fluoreszenzbildes und hält die Option bereit, das Messergebnis zu verifizieren (Abbildung 2). Verschiedene Event Populationen können in den Punktediagrammen ausgewählt und überprüft werden, sowie wenn nötig von dem Endergebnis ausgeschlossen werden. Die adaptierten Protokolle können für zukünftige Messungen abgespeichert werden, wodurch die Reproduzierbarkeit entscheidend verbessert wird.
Der Nucleocounter® NC-200™ ist kalibriert und 21 CFR part 11 ready
Die Herstellung von CAR-T Zellen für den Einsatz in klinischen Studien muss unter GMP-Richtlinien erfolgen, um eine sichere, personalisierte Therapie zu gewährleisten. Der NucleoCounter® NC-200™ kann einfach und unproblematisch in Labore unter GMP und 21 CFR Part 11 Standards implementiert werden. Vorgefertigte Protokolle für IQ/ OQ/ PQ gewährleisten eine konsistente Validierung. Standarisierte PDF Reporte, elektronische Signaturen und Prüfprotokolle sichern eine lückenlose Kontrolle (Abbildung 3). Mit der Via1-Cassette™ werden anwenderspezifische Ungenauigkeiten, welche beim Pipettieren, Färben und Zählen auftreten können, vollständig eliminiert. Somit werden robuste und äußerst präzise Ergebnisse generiert.
Literatur:
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