Zellzyklus-Analyse mittels bildgebender Zytometrie
– Zellzyklus in zwei Schritten mit dem NucleoCounter® NC-3000™
Der Zellzyklus und die Zellteilung sind fundamental wichtige Prozesse in eukaryotischen Zellen. Mit dem Zellzyklus-Assay im NucleoCounter® NC-3000™ kann in zwei einfachen Schritten ein vollständiges Zellzyklus-Profil von Säugetierzellen in weniger als 10 Minuten erstellt werden. Durch die Verwendung des Fluorophors DAPI wird die DNA-Färbung quantifiziert. Die Ergebnisse werden nutzerfreundlich in einem Zellzyklus-Histogramm präsentiert.
Das Wichtigste:
- Schnelle und einfache Messung der Zellzyklus-Phasen
- Analyse und Datenpräsentation in nur einem Schritt
- Reproduzierbare Ergebnisse
- Keine RNAase notwendig
- Keine Kalibrierung
- Datenanalyse im Plotmanager
Zellzyklus-Assay in zwei Schritten
Zellzyklus an fixierten Zellen
Application Note (.PDF):
Zellzyklus-Analyse mit dem NC-3000™
Mit dem NucleoCounter® NC-3000™ kann der Zellzyklus einfach und schnell bestimmt werden. Die Zellen werden mit Lysepuffer, DAPI und Stabilisierungspuffer gemischt und die Probe mit dem NucleoCounter® NC-3000™ gemessen. Die NucleoView™ Software zeigt über den Plotmanager ein Zellzyklus-Histogramm an, in welchem die Gates für die einzelnen Zellzyklus-Phasen Sub-G1, G1/G0, S und G2/M definiert werden können. Mit der FlexiCyte™ Software kann die Zellproliferation auch über fluoreszent gekoppeltes BRdU oder EdU detektiert werden.
Zellzyklus mit DAPI
Der Zellzyklus-Assay im NucleoCounter® NC-3000™ verwendet das Fluorophor DAPI für den Nachweis des DNA-Gehaltes. DAPI bindet gezielt an doppelsträngige DNA. Im Gegensatz dazu bindet Propidiumiodid, welches oftmals für Zellzyklus-Analysen verwendet wird, neben DNA auch RNA. Wird DAPI verwendet, muss somit keinerlei RNAase verwendet werden. Mit dem NucleoCounter® NC-3000™ wird der DNA-Gehalt quantifiziert und anschließend die einzelnen Stadien des Zellzykluses detektiert.
Nach der Probenvorbereitung werden die Proben entweder in die NC-Slide A2™ oder die NC-Slide A8™ für die Messung im NucleoCounter® NC-3000™ geladen. Der NucleoCounter® NC-3000™ analysiert automatisch die Fluoreszenzbilder und stellt die Verteilung des DNA-Gehaltes in einem Zellzyklus-Histogramm dar.
Die Ergebnisse im Plotmanager
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