Bestimmung der Zellzahl in einer Microcarrier Zellsuspension mit dem NucleoCounter®

Microcarrier zur Kultivierung von adhärenten Zellen

Für die Herstellung von Impfstoffen, Medikamenten und zellulären Produkten für die Anwendung in der Zelltherapie ist ein großer Produktionsmaßstab unerlässlich. Die Erhöhung der Virus- und Zellproduktion zur Prozessoptimierung kann sich jedoch als problematisch erweisen, da adhärente Zellen oftmals in Zellkulturflaschen expandiert werden. Eine platzsparende und geeignete Alternative hierzu stellt die Verwendung von Microcarriern dar. Microcarrier dienen als Substrat für die Adhäsion von adhärenten Zellen und erlauben die Zellexpansion in großem Maßstab in einem Bioreaktor, wobei die einzelnen Microcarrier Zellkomplexe in einer Nährlösung als Suspension vorliegen. Dieser Ansatz optimiert und vereinfacht den Produktionsprozess entscheidend.

Save

Save

Das Zählen von Zellkernen

Die Zellkerne werden mit dem selektiven DNA-Fluoreszenzfarbstoff DAPI spezifisch angefärbt, wobei eine präzise Detektion von Zellen und auch die Unterscheidung zu Zelltrümmern möglich ist. Die einzigartige Via1-Kassette™ kombiniert den mehrstufigen Ablauf bei der Zellzählung in einem einzigen Schritt. Hierzu wird die Via1-Kassette™ in den NucleoCounter NC-200™ oder NC-3000™ eingebracht und die Zellzahl sowie die Viabilität automatisch bestimmt.

Zeitsparende Zählung einer Microcarrier Zellsuspension

Die Zellzahl und die Viabilität sind entscheidende Parameter bei der großflächigen Überwachung einer Bioproduktion. Üblicherweise beinhaltet die Zählung einer Microcarrier Zellsuspension mehrere aufwendige Schritte. Zunächst werden die Zellen durch Trypsin enzymatisch von den Microcarriern abgelöst und anschließend mit Trypanblau angefärbt, wobei diese Methode zeitaufwändig und ungenau ist.

Ein Vergleich der Zählung einer Microcarrier Zellsuspension mit Trypsin und Trypanblau sowie mit dem NucleoCounter® macht den Unterschied deutlich: Im Vergleich zur herkömmlichen Zellzählung eliminiert der NucleoCounter® etliche Zentrifugations-, Inkubations- und Pipettierschritte und vermindert die benötigte Zeit auf weniger als 5 min.