Zellzählung von Tiersamen
Anwendungen des NucleoCounter® SP-100™
Bestimmung der Zellzahl und Viabilität der Spermien mit dem NucleoCounter® SP-100™
Für die Bestimmung der Anzahl an Samenzellen wird hierzulande häufig ein herkömmliches Photometer verwendet. Jedoch ist diese indirekte Messmethode sehr fehlerbehaftet, da die Messung durch Staub, Zelltrümmer und Gelpartikel verfälscht wird und der CV 10 % oder mehr beträgt. Das Ejakulat wird direkt nach der Abnahme in einem Streckmittel verdünnt, damit die Spermien nicht absterben. Das Streckmittel für den Samen basiert oftmals auf Eigelb, dies stört jedoch die Zellzählung mit einem Photometer sehr stark.
Der NucleoCounter® SP-100™ ist ein Zellzählgerät, welches die Anzahl und die Viabilität von Spermien akkurat und reproduzierbar bestimmen kann. Das Ejakulat wird mit einem Lysepuffer vermischt, dadurch werden alle Zellen abgetötet und anschließend die Zellkerne über die SP1-Cassette™ angefärbt. Hierfür enthält die SP1-Cassette™ bereits das Fluorophor Propidiumiodid, welches spezifisch die DNA anfärbt. Die SP1-Cassette™ wir direkt in den SP-100™ eingebracht und die Zellzahl wird automatisch ermittelt (Abbildung 1). Dies ist eine direkte Messmethode – Zelltrümmer oder die Wahl des Streckmittels beeinflussen die Messung nicht, wobei eine hohe Präzision mit einem CV % von unter 3 % erreicht wird. Der SP-100™ ist dabei vollständig wartungsfrei und Bedarf keinerlei Reinigung – perfekt geeignet für die Zellzählung von Tiersamen in der Tierproduktion.
Abbildung 1: Bestimmung der Zellzahl und der Viabilität von Tiersamen. Die Vorbehandlung mit dem Reagenz S100 lysiert alle Zellen. Durch Propidiumiodid (PI) werden anschließend die Zellkerne angefärbt und die Gesamtzellzahl mit dem NucleoCounter® SP-100™ bestimmt. In einem zweiten Schritt werden die Zellkerne der toten Zellen ohne Vorbehandlung angefärbt.
Eber
Die selektive Züchtung von verschiedenen Merkmalen bei Schweinen ist wichtig für das Wachstum, sowie für das richtige Verhältnis von Muskeln und Fett. Bei der künstlichen Befruchtung sollten genügend Samenzellen verwendet werden, um die Chancen auf eine erfolgreiche Befruchtung zu steigern. Üblicherweise werden hierfür 80 ml Sperma mit 2,5 Milliarden Zellen (Europa) bzw. mehr als 3 Milliarden Zellen (USA) verwendet. Das Ejakulat eines Ebers enthält zwischen 10 – 100 Milliarden Spermien. Werden die Zellen präzise mit dem SP-100™ ausgezählt und jeweils 3 Milliarden Zellen einzeln abgepackt, so können bis zu 31 Einheiten hergestellt werden – nach der Zellzählung mit einem Photometer nur 26 Einheiten, da der CV% Wert oftmals 10 % oder mehr beträgt.
Rinder
Hengste
Andere Spezies
Der Samen von Hengsten, Rindern und Ebern wird bereits routinemäßig mit dem NucleoCounter® SP-100™ gemessen.
Für alle anderen Spezies kann die Zellzahl und Viabilität der Spermien ebenfalls erfolgreich bestimmt werden – kontaktieren Sie uns gerne für nähere Informationen.
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